本发明公开了一种一步式双层微液滴生成装置包括微量流体注射模块、微流控芯片和液滴收集模块，微流控芯片的入口和出口通过毛细管分别连接于微量流体注射模块和液滴收集模块；微流控芯片为轴对称结构，对称轴上分别设置有外部相入口、中部相入口、内部相入口、流动聚焦模块和液滴出口，流动聚焦模块为5入1出的对称六连通结构，外部相入口经一个三通模块后通过微流道连接于流动聚焦模块的A口和E口，中部相入口经一个三通模块后通过微流道连接于流动聚焦模块的B口和D口，内部相入口通过微流道连接于流动聚焦模块的C口，流动聚焦模块的F口连接于液滴出口。本发明结构简单，简化了微流控芯片的制作工序，缩短了制作周期，提高了生产效率。