本发明提供一种组织封闭胶组合物，组织封闭胶及其制备方法和应用，组织封闭胶组合物包括：第一组分和第二组分，其中，所述第一组分包括：含有氨基的天然物质和/或在含有氨基的天然物质上修饰有巯基的第一修饰产物，所述含有氨基的天然物质和所述第一修饰产物各自独立的具有10个以上的活性基团，其中，所述活性基团为氨基、巯基；所述第二组分包括：在海藻酸钠和/或羧甲基纤维素上修饰有10以上的N‑琥珀酰亚胺基的第二修饰产物。本发明的组织封闭胶具有较高的抗破裂强度和较低的溶胀率，并且具有良好的粘合性，可以使组织创面快速闭合，有效起到组织封闭的作用，防止组织液、血液或脑脊液泄漏，减轻病人的痛苦，避免了更多的危险性。