本发明公开了一种测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法，该方法包括如下步骤：提供氨基酸分析仪和色谱柱；配制分离分析用的缓冲液；配制衍生化反应试剂；流动相流速为0.40ml/min，衍生试剂流速为0.35ml/min，柱温57℃，反应器温度为135℃，检测波长570nm，进样量5μl，按梯度洗脱；供试品溶液的配制；对照品溶液的配制和色谱测定。其中色谱测定时按外标法以峰面积计算供试品溶液中游离氨的浓度，并根据供试品溶液配制方法计算复方氨基酸注射液中游离氨的含量。还涉及使用本发明方法测定的复方氨基酸注射液。本发明方法呈现如说明书所述优异技术效果，例如快速、简便、灵敏、稳定。