本发明公开了一种提高大肠杆菌中己二酸产量的方法，属于生物工程领域。本发明是以敲除了atoB基因的大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块过量表达β‑酮硫解酶基因、3‑羟酰基‑辅酶A脱氢酶基因、3‑羟基己二酰脱氢酶基因、5‑羧基‑2‑戊烯酰辅酶A还原酶基因、己二酰辅酶A，己二酸的产量可达到25.57g/L。此重组菌还可进行循环发酵，最终经过十次循环，己二酸产量累积量达18.94g/L；这对于工业上连续化的大生产有着重要作用，可以减少菌体生长时间，直接利用循环菌体发酵省时，快速，节约成本。