本发明公开了一种基于细胞源性微囊泡的肿瘤靶向递送载体及制备方法和应用，步骤是：A.配置条件培养基：基础培养基中补充胎牛血清、抗生素、DSPE‑PEG‑Biotin和DSPE‑PEG‑Folate；B.将获得的条件培养基用于细胞培养，收集细胞培养上清，用于后续分离；C.将获得的培养上清低速离心去除细胞碎片和凋亡小体后添加SA‑IONPs，混匀并孵育后用磁铁分离，用PBS重悬并洗脱数次后获得膜表面经叶酸及氧化铁纳米颗粒修饰的细胞源性微囊泡，冻存；D.经电穿孔方式向双重修饰的功能化微囊泡内载入化疗药物或治疗基因，用磁铁分离后重悬。适用于多种肿瘤化疗药物及治疗基因的特异性靶向输送；增强抗肿瘤效果，降低全身毒性，提高了当前治疗选择的临床效果，为肿瘤的临床治疗带来了新的希望。