本发明公开了柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50%甲醇配制成一定浓度的对照品溶液。本发明通过以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂，采用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm测定柴胡炮制前后氨基酸的含量，本测定方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势，可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。