本发明涉及一种头孢噻肟钠有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以流动相A和流动相B的混合液为流动相，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，pH为6.0～7.0，所述流动相B为甲醇，pH为6.0～6.5，色谱柱选自CAPCELL PAK MG系列，通过梯度洗脱的方式对待测样品进行检测。本发明提供的方法可在高效液相色谱图中将头孢噻肟钠有关物质(包含头孢噻肟钠和12种杂质)分离开来；并通过方法学验证，使得对各组分检测的灵敏性和准确性进一步得到提升。