本发明公开了基于响应面法优化鳖血柴胡炮制工艺，包括以下步骤：S1、鳖血柴胡饮片的制备；S2、柴胡皂苷含量的测定；其中，步骤S2柴胡皂苷含量的测定，包括以下步骤：S201、对照品溶液的制备：分别精密称取柴胡皂苷a对照品2.00mg，柴胡皂苷d对照品2.94mg，置于5mL量瓶中，用适量甲醇将其溶解，再用甲醇定容至刻度，过0.22μm微孔滤膜，备用。本发明通过以HPLC测得的主要药效成分柴胡皂苷a、d之和为响应指标，采用多因素多水平的响应面法建立回归模型，确定鳖血用量、炒制温度、炒制时间对鳖血柴胡炮制工艺的影响，从而确定最优工艺条件，使得鳖血柴胡炮制工艺考察简单，可靠。